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1、IGF-1試劑盒前言說明

類胰島素生長因子1試劑盒為血清IGF-1的定量檢測提供了其所需材料。此檢測試劑盒僅供提外診斷用。

2、IGF-1試劑盒臨床意義

類胰島素生長因子-1（IGF-1）是一由70個氨基酸分子組成的多肽（分子量為7650道爾頓），它是胰島素循環過程中眾多相關類胰島素生長因子中的一種。此分子與前胰島素大約有50%的同源性，并且它有很多與胰島素相似的生物學功能。此多肽具有高度的生長激素（GH）依賴性，但也越來越表現出GH非依賴性分泌。IGF-1有很多促進生長的功能，包括促進細胞分裂和軟骨的硫酸化,它也可顯示出骨的更新速度。循環中的IGFP-1幾乎有95%以上都結合到特異性IGF結合蛋白（目前知道它有六個亞種）上。BP3是IGF-1的主要結合蛋白，它與IGF-1及一個酸性易變亞基一起形成一分子量為140000道爾頓的三元絡合物。

3、類胰島素生長因子1試劑盒臨床應用

血清IGF-1的檢測在小孩生長紊亂及支端肥大癥的診斷和治療檢測中具有重要意義。IGF-1的濃度會隨人的年齡、營養狀態、身體結構和生長激素的分泌而發生變化。IGF-1的檢測有利于身材矮小兒童的評價和惡性疾病病人的營養學研究。在支端肥大癥的診斷中，IGF-1的檢測與隨機GH的檢測相比，前者更具有可靠性。

4、實驗原理

IGF-1 600ELISA試劑盒是一種固相的酶聯免疫實驗，采用爭競法的原理。實驗開始前將病人樣品、標準品和質控品先酸化和中和好。包被板的微孔中包被了單克隆抗體，這種單克隆抗體對IGF-1分子上的某單一抗原位點具有特異性。將預先處理好的樣品與酶聯物（生物.素標記的IGF-1）在室溫下溫育。之后洗板，再加入酶復合物（辣根過氧酶標記的鏈親和素）并溫育。加入底物溶液后，溶液所顯示的顏色強度與病人樣品中IGF-1的濃度成反比。

5、成分

1. 1M的HCl ，1支，3ml，即用，用于樣品的酸化。

2. 1M的NaOH，1支，3ml，即用，用于中和。

3. 包被板，12×8（可拆），96孔，包被孔中包被了抗IGF-1抗體（單抗）

4. 標準品（標準品0-6），7支，1ml，濃度：0；5；10；50；150；300；600ng/ml。NIBSC編號：87/518，轉換系數：1ng/ml×0.13=nmol/l。內含0.03%的Proclin300和0.005%的慶.大霉素硫酸鹽做為防腐劑。

5. 酶聯物，1支，14ml，即用，生物.素標記IGF-1，內含0.01%的甲基異噻唑酮，0.02%的BND防腐劑。

6. 酶復合物，1支，20ml，即用，HRP標記的鏈親和素復合物。

7. 底物液，1支，14ml，即用，TMB

8. 終止液，1支，14ml，即用，內含0.5M的H2SO4。避免接觸終止液，以免著燒或刺激皮膚。

9. 洗滌液，1支，30ml（40倍濃縮）

注意：用于樣品稀釋的零標準品應視需要而定。

6、IGF-1試劑盒實驗所需器材（但試劑盒不提供）

1. 酶標儀

2. 移液器

3. 吸水紙

4. 蒸餾水

5. 1.5ml的反應杯（用于樣品的準備）

6. 通用的指示紙

7、IGF-1試劑盒的儲存與穩定性

  未開啟的試劑在2—8℃下貯存，在有效期內可以保持活性。不要使用過期試劑。開封了的試劑必須儲存于2-8℃的環境下。微孔反應板也必須在2—8℃下貯存。一旦包裝袋被打開，必須將它小心地嚴封起來。拆開包裝后，包被的微孔反應板的免疫活性可在約6周內保持穩定，但必須密封在裝有干燥劑的袋子里。

8、IGF-1試劑盒樣本

血清可以用于此實驗，注意：據觀察，血漿中的IGF-1濃度明顯降低。切勿使用溶血、黃疸或脂血樣品。請注意：含疊氮鈉的樣品不能用于此實驗。

8.1樣品的采集

血清：靜脈穿刺采集全血，待其凝血，室溫下離心獲取血清。在樣品未*凝結前請勿離心。接受了抗凝血治療病人的樣品可能需要更長的凝血時間。

8.2樣品的儲存：

樣品應當立即檢測。如果實驗前想要將樣品存放更長的時間，則應將樣品凍存于-20℃的環境下。解凍的樣品在實驗前應反復倒置幾次。

8.3樣品的稀釋：

在*實驗時，如果血清樣品中IGF-1的濃度高于zui高標準品中IGF-1的濃度，則應將此樣品用零標準品稀釋，并按實驗步驟重新檢測。在計算濃度時應當將此稀釋因子考慮進去。

例如：

• 按1：10的比例稀釋：10μl的血清+90μl零標準品（充分混合）

• 按1：100的比例稀釋：10μl已稀釋好的a）+90μl零標準品（充分混合）

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9、病人樣品和標準品的酸化與中和

1. 在1.5ml的反應Caps中加入200μl樣品、標準品和質控孔。請注意：按照下列所述步驟，標準品既要進行酸化，也要進行中和。

2. 在加入20μl 1M的HCl。

3. 混合并溫育15min。

4. 向所有的Caps中加入20μl 1M的NaOH進行中和，混合溶液。

5. 中和之后的pH值應該是7到8之間，請用通用指示紙檢測pH值。