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我公司1,25雙羥基維生素D試劑盒優勢

2016-05-18 瀏覽次數:3743

我公司新品1,25雙羥基維生素D試劑盒操作簡單方便,不需氮吹儀,現貨供應,下面是介紹:

1、 125雙羥基維生素D試劑盒預期用途
運用酶聯免疫法體外定量檢測血清中的1,25-二羥基維生素D的濃度


2、 125雙羥基維生素D試劑盒基本信息


3 125雙羥基維生素D試劑盒臨床背景
A 125雙羥基維生素D試劑盒生物活性
維生素D主要由皮膚中的7-脫氫膽固醇合成,部分來源于飲食和補充劑。在肝臟中,維生素D25位碳原子羥基化生成25-羥基維生素D25-羥基維生素D進一步在腎臟和其它組織代謝,羥基化生成有活性的維生素D1,25-二羥基維生素D,作用于腸、腎臟、骨骼和其它組織器官。孕婦胎盤和結節病的巨噬細胞也產生1,25-二羥基維生素D


1,25-二羥基維生素D是維生素D的活性形式,而25-羥基維生素D和維生素D本身是無活性的。1,25-二羥基維生素D促進腸道對鈣、磷的吸收,促進骨的吸收和礦化,從而防止佝僂病軟骨病125-二羥基維生素D存在于負責其轉運的組織(胎盤、腎臟、乳腺)和內分泌腺,如甲狀旁腺1,25-二羥基維生素D代謝快,在血中的半衰期大約12h,主要代謝產物是維生素D3-23羧酸,一個C-23的羧酸衍生物,沒有生物活性。另一條途徑,1,25-二羥基維生素D經過24-羥基化生成活性較低的1,24,25-三羥基維生素D,是一次要途徑。


1,25-二羥基維生素D在血清或血漿中的濃度比25-羥基維生素D1001000倍。由于濃度低及存在很多類似物,測定1,25-二羥基維生素D需要層析柱提取和分離。


B125雙羥基維生素D試劑盒臨床應用
1,25-二羥基維生素D水平失常,影響鈣的代謝,如:磷代謝、類肉狀瘤病,腎衰竭、甲旁亢和甲旁低、腫瘤引起的高鈣血癥、高鈣尿、維生素耐受功能障礙,抗驚厥藥物治療。


4125雙羥基維生素D試劑盒檢測原理
樣本和質控品需要經過混合溶劑的提取和層析柱的分離,使1,25-二羥基維生素D和其它維生素D代謝物分開,校準品不需要經過層析柱分離。之后,將校準品、純化的樣本和質控品直接加入包被1,25-二羥基維生素D的微孔板中孵育。

操作步驟 Ⅰ. 提取步驟:!只用于質控品和樣本 1. 試管(12 x 75 mm)編號:2個質控品和zui多40個樣本。 2. 每個試管中加入0.5 mL質控品或樣本。 3. 每個試管中加入2 mL提取溶劑。 4. 蓋上試管蓋,1200 rpm振蕩1h 5. 室溫下離心5min800g)。 6. 上清液用于下一步分離。


. 分離步驟:!只用于質控品和樣本。 1. 玻璃管(16 x 100 mm)(12 x 120 mm),或塑料管(falcon 2097)編號,用于層析:2個質控品和zui多40個樣本。 2.每個管中放一個二氧化硅層析柱。 3.從層析柱上端加入1.6mL提取上清液(2 x 0.8mL),在重力作用下慢慢滴下。 4.1mL洗滌液洗層析柱參見試劑制備 !注意:每個層析柱上不能出現真空,因為需要重力作用。 5.從層析柱上端加入500μL二氯甲烷,在重力作用下慢慢滴下。 6.從層析柱上端加入500μL蒸餾水,室溫離心5min800g)。 7.試管(12 x 75 mm)編號,用于洗脫1,25-二羥基維生素D。離心后,將層析柱中的物質轉移到相應的玻璃試管中。8.從每個層析柱上端加入300μL 洗脫液用來洗脫1,25-二羥基維生素D,然后室溫下離心5min800g)。 9.混勻洗脫餾分。 注意:此步之后,樣本必須立即加入微孔板中孵育,防止樣本降解。 Ⅲ. 孵育 1.選擇所需數量的微孔進行試驗。未使用的微孔應放回有干燥劑的包裝袋中封好,儲存在于2-8℃。 2.將微孔安裝到固定架上。 3.用旋渦混合器混勻校準品、提取的質控品和樣本。 4.加入150uL孵育緩沖液到所有的微孔中。 5.加入50uL的校準品(未提取),洗脫的質控品和樣本到對應的微孔中。 6.用封板膜封閉或蓋上微孔板,2-8℃下孵育18±2h。 一夜孵育后,洗板前60min+/-15min準備辣根過氧化物酶結合物工作液. 7.從每個微孔中吸出液體。 洗板3次:加入洗滌液0.35mL到每個微孔中吸出各微孔中的溶液 8.加入200uL的辣根過氧化物酶結合物工作液到微孔板的每個微孔中。 9.用封板膜封閉或蓋上微孔板,4℃下孵育 1h
10.從每個微孔中吸出液體。 洗板3次:加入洗滌液0.35mL到每個微孔中吸出各微孔中的溶液 11.洗板后15分鐘內,吸取200uL顯色溶液加入到每個微孔中。 12.室溫下,孵育15分鐘,避免陽光直射。 13.在各微孔中加入100uL終止液。 14.1小時內,讀取450 nm下的吸光度值(參考波長630nm650nm)。

 

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