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介紹糞便鈣衛蛋白試劑盒的操作步驟

2019-05-20 瀏覽次數:2908

     糞便鈣衛蛋白是診斷腸炎疾病嚴重性的一個指標,腸炎性疾病(IBD)患者的糞便鈣衛蛋白濃度高,其疾病復發的風險增大。低糞便鈣衛蛋白濃度與腸的同種異體移植排斥的低風險相關。該檢測使用特異性單克隆抗體,確保測試只檢測到鈣衛蛋白。因此糞便鈣衛蛋白試劑盒是比不可少的。
    糞便鈣衛蛋白試劑盒的操作步驟主要分為FC測定抽提步驟和ELISA步驟:
    一、FC測定抽提步驟:
     1、將空的15ml聚丙烯試管連同接種環一起稱重,將精密天平歸零。
     2、冷凍糞便在室溫下解凍后,用接種環挑取50~100mg糞便,準確稱重。
     3、按糞便重量(mg):抽提緩沖液體積(ml)=1:49的比例加入抽提緩沖液,蓋上試管。
     4、在渦旋振蕩器上渦旋5分鐘,直至混勻。
     5、將混勻的液體移入2ml離心管,高速離心5分鐘。
     6、將上清液移入標記好的試管中。
    二、ELISA步驟:檢測前將試劑平衡至室溫
     1、用孵育緩沖液將糞便抽提液按照1:150稀釋,充分混勻。
     2、將試劑盒中96孔板清洗2遍,甩干。
     3、分別吸取100ul稀釋后的樣本,標準品及質控品以此類推。
     4、用封膜封板,置于水平搖床,18~28°C孵育30分鐘。300轉/分鐘。
     5、清洗5遍.
     6、每孔均加入100ul酶標液。
     7、用封膜封板,置于水平搖床上,18~28°C孵育30±5分鐘。300轉/分鐘。
     8、清洗5遍,甩干。
     9、每孔均加入100ulTMB底物液。
     10、用封膜封板,置于水平搖床上,避光,18~28°C,孵育15±2分鐘。
     11、每孔均加入100ul終止液,用吸頭除去氣泡,30分鐘內進行第13步。
     12、用酶標儀在450nm處讀數。

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